ПЦР анализ: что это такое
Еще совсем недавно, каких-нибудь десять лет назад при диагностике заболеваний, передающихся половым путем, в ходу были простые и бюджетные методики лабораторных исследований.
Они якобы давали исчерпывающее представление о возбудителях половых инфекций и их наличии в организме человека.
Трихомонаду и гонококк было принято искать в мазках.
Окрашены они были самыми разными красителями под самым простым световым микроскопом.
Разве что лаборант мог плеснуть иммерсионного масла для лучшей подсветки.
Никого особо не смущало, что красители меняют форму и подвижность тех же трихомонад.
После чего отличить их от патологически измененной клетки эндотелия весьма проблематично.
Хламидий, вернее антитела к ним, титровали из крови.
Уреаплазмы и микоплазмы выращивали колониями на твердых и жидких средах, по неделе ожидая, пока колонии заколосятся.
В целом их считали условными патогенами.
И предпочитали не замечать, пока не расцветала клиника урогенитальной инфекции или не вставал вопрос о бесплодии.
Метод ПЦР диагностики стал революцией в лабораторном деле.
Раз и навсегда она решила проблему сжатых сроков диагностического поиска.
Максимально приблизила ответ на вопрос “Что вызвало воспаление?” к первому визиту пациента к специалисту.
Сегодня никого не надо заставлять дожидаться ответов анализов по неделе.
И с замиранием сердца готовиться к худшему, временно вместо антибактериального или противовирусного лечения принимая успокоительные.
Содержание статьи
Суть метода ПЦР
Если доступно отвечать на вопрос “ПЦР-анализ, что это такое?”, — то придется вспомнить следующее.
Всякое живое существо несет в себе наследственную информацию, которую получает от родителей и передает детям.
Это либо РНК (рибоксинуклеиновая кислота), либо ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота).
Либо и то, и другое, в одном существе в разных вариантах.
РНК – это одна цепочка нуклеиновых кислот, ДНК – две.
Собственно, вот эти цепочки или их обломки и ищут, когда ведется ПЦР-диагностика инфекций.
- Так как генетический код уникален для разных видов инфекционных агентов, попасть впросак, как при световой микроскопии, то есть, принять один вид паразита за другой не представляется возможным. Такая точность называется сто процентной специфичностью.
- Второй критерий, подтверждающий точность диагностики, – это чувствительность ПЦР-анализа. Она тоже не подкачала и составляет сто процентов.
По сути, этот параметр показывает, сколько микробов или вирусов, или их фрагментов должно попасть в образец для исследования, чтобы анализ мог отреагировать на их присутствие.
Когда проводят ПЦР-диагностику, для успешности достаточно даже обломков наследственного материала.
Это позволяет зафиксировать присутствие возбудителя в крови даже в прошлом (до полугода от того момента, как лекарства успешно справились с заразой).
Это делает ПЦР уникальным ретроспективным методом.
Для оценки ранее существовавших, но уже утраченных поводов для воспалений, с последствиями которых приходится иметь дело клиницистам (например, бесплодием).
То есть имеется бесплодная пара и все еще не ясно, в чем заключается причина проблемы.
На данный момент оба клинически здоровы, за исключением, скажем, изменений в спермограмме у мужчины.
С помощью ПЦР можно установить, какие именно инфекции присутствовали в организме мужчины за последние полгода и предположить, что именно они стали камнем преткновения.
Спектр применения ПЦР анализа
Какие инфекции можно проверить ПЦР-анализом?
Да практически любые.
Острые, хронические, рецидивирующие, даже ранее существовавшие.
Бактериальные, грибковые, вирусные, протозойные.
Любой инфекционный агент, имеющий геном, можно засечь методом амплификации нуклеиновых кислот.
В половых и мочевыводящих путях, ухе, горле, носу, дыхательной системе, ЖКТ.
С любого участка тела, с которого удастся получить образец клеток.
Это дает методике очень широкий спектр применения.
Что касается забора образцов для исследования, пожеланием врачей-лаборантов остается предоставление тех тканей, в которых подозревается наличие возбудителя.
Хотя кровь и продолжает считаться универсальным материалом для анализа, не стоит пренебрегать исследованиями того, что получено непосредственно с “места событий”.
- Если воспаление развивается в уретре или вышележащих мочевых путях предпочтительны соскобы эндотелия из нее или моча.
- При наличии вульвита – соскоб влагалищного эндотелия, цервицита – слизистой из шеечного канала.
- Можно подвергнуть анализу простатический секрет, сперму, соскобы из прямой кишки, отделяемое конъюнктивы глаз, соскобы и мазки из ротоглотки, спинномозговую жидкость. И это только в урологии и гинекологии.
- Реакцию используют во фтизиатрии для верификации возбудителей нетипичных пневмоний и туберкулеза.
Исследование может проводиться в день первого обращения к врачу, если будет произведен забор образцов.
Ответы выдаются в течение первых двух суток.
При необходимости в течение нескольких часов.
Таким образом, метод — экспресс-диагностика, сильно сокращающая сроки лечения и ускоряющая его начало.
Сбор материала для ПЦР анализа
Стандартно выполняются соскобы и мазки у женщин на гинекологическом кресле.
У мужчин при урологическом осмотре.
Чаще всего это все же соскоб эндотелиальных клеток мочевыводящих путей.
При отсутствии воспалительных изменений болей при манипуляции нет.
Воспаленные слизистые более подвержены микротравмам и могут давать незначительные контактные кровотечения.
С ними ничего не нужно делать, проходят самостоятельно за несколько часов или суток.
Для женщин сначала выполняется забор проб из уретры, затем из влагалища и наконец из шеечного канала.
- Цервикальный материал забирается тампоном-щеточкой или стандартным ватным тампоном, с которого пробу переносят в пробирку с транспортной средой.
- Из уретры забор предусмотрен тампоном или бактериологической петлей из пластика.
Они вводятся на пару сантиметров и вынимаются с легким нажимом на стенки уретры.
Полученный образец также переносится в пробирку.
- Соскоб из влагалища берется с использованием стерильного ватного тампона. При выборе участков забора образца предпочтение отдается измененной слизистой или заднему своду влагалища.
У мужчин соскоб предполагает использование урологического зонда.
Он вводится в мочеиспускательный канал на глубину 3-4 сантиметра и вынимается с легким нажатием на стенки уретры.
Образцы других биологических жидкостей и тканей берутся в лаборатории или на приеме у профильного специалиста.
- Венозная кровь натощак утром или после шестичасового голодного промежутка в процедурном кабинете.
- Сперма – в лаборатории собирается пациентом.
- Мазки из прямой кишки, ротоглотки, отделяемое конъюнктивы – средним мед персоналом на приеме у врача.
- Простатический секрет – на приеме у уролога после массажа простаты.
- Для мочи предусмотрен сбор утренней порции в объеме 30-50 миллилитров после гигиенического туалета половых органов.
- Мокрота собирается утром после питья небольшого количества теплой жидкости при отхаркивании в стерильную аптечную емкость.
- Спинномозговая жидкость (ликвор) – при проведении пункции.
Что делать перед ПЦР исследованием
Очень часто у пациентов клиник и лабораторий возникает масса вопросов по поводу того, как готовиться, ПЦР-анализ требует ли специальных мероприятий от пациента.
Чтобы исследование стало максимально достоверным, желательно соблюдение некоторых условий.
Подготовка к ПЦР крови и мазка включает следующие пункты.
- За две недели не должны употребляться антибактериальные, противовирусные и противопротозойные лекарственные средства.
- Перед тем, как берется мазок на ПЦР анализ, исключаются антисептики для местного применения. В том числе, в средствах для интимной гигиены.
- Перед забором материала из мочеиспускательного канала следует не мочиться 2-3 часа до мероприятия.
- Перед забором крови нельзя употреблять пищу, по крайней мере, на протяжении шести часов.
- Перед исследованием эякулята секс противопоказан двое суток.
Какие врачи берут ПЦР-анализы
Обычно это гинеколог, уролог и венеролог.
То есть специалисты, которым требуется чаще других сталкиваться со скрытыми вариантами или носительством инфекций, лечение которых нужно начинать как можно скорее.
Не менее редко в ПЦР нуждаются инфекционисты.
Особенно в случаях внутриутробных инфекций или других инфекционных процессах невыясненной этиологии.
Сколько по времени делается ПЦР-анализ, зависит от возможностей лаборатории и срочности, с которой нужно получить ответ.
Обычно это не более трех рабочих дней.
Кому и когда необходим ПЦР анализ
Стандартными ситуациями, требующими применения данного обследования, становятся:
- Выявление при клиническом осмотре или в жалобах пациента признаков островоспалительных изменений мочеполового тракта.
- Для верификации причины воспалительных явлений.
- У пациентов с бесплодием для уточнения причин.
- В ходе планирования беременности.
- Во время наступившей беременности для женщин.
- Планирование экстракорпорального оплодотворения.
- Необходимость проконтролировать эффективность терапии венерического заболевания или носительства возбудителя ИППП (по истечении месяца от окончания терапевтического курса).
- Необходимость первичного обследования для тех, у кого за последний год было два и более сексуальных партнеров. Подобный скрининг нацелен на выявление скрытых инфекций.
Особенности ПЦР диагностики
Проявляемая анализом высокая чувствительность к половым инфекциям позволяет работать методикой при разных видах возбудителей.
Лучше всего выявляются уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, а также вирусы папилломы, герпеса, гепатитов, ВИЧ, цитомегаловирус.
Есть возможность применить диагностическую тактику сразу после заражения.
В ходе исследования амплификатор периодически нагревает и охлаждает образцы с добавленными ферментами-ускорителями в пробирках.
На первом этапе расщепляют двойную цепочку ДНК искомого возбудителя.
Затем на ее короткий участок садятся два праймера (затравки) из стандартного набора, уникальные для данного возбудителя.
Для образования гибрида между матричной ДНК и праймером требуется повысить температуру.
После этого происходит удвоение участков ДНК инфекционного агента и их выделение электрофорезом и выявление.
В дальнейшем участок можно изучать и типировать.
Методика незаменима в ситуациях, когда возбудители не поддаются культуральному выращиванию, ускользают от серодиагностики.
Цена мазка и крови может несколько отличаться в разных клиниках и лабораториях.
Целесообразно, чтобы забор материала проводился в клинике, оснащенной лабораторными мощностями.
Это позволяет ограничить загрязнение образцов посторонними микробными примесями.
ПЦР-диагностика: расшифровка
Анализ совмещает в себе достоинства качественного и количественного теста.
Качественные характеристики отражают в бланке отметками “не обнаружено”.
То есть ответ отрицательный
Или “обнаружено” при положительной пробе.
- Отрицательному ответу соответствует ситуация, когда нет даже намеков на удвоение нуклеиновых цепочек даже при стимуляции ферментами-ускорителями. Это происходит, когда РНК или ДНК, характерные для искомого возбудителя, отсутствуют либо их количество находится за порогом чувствительности теста.
- Положительные результаты приходят, если имеется разгар клинических проявлений инфекционного процесса или носительство инфекционного агента. После лечения половой инфекции положительный результат регистрируется на протяжении первых девяти месяцев в среднем (могут быть сокращения сроков до трех или удлинение до двенадцати месяцев).
Ложноотрицательный и ложноположительный анализ тоже возможны.
Сразу после лечения и в течение шести-девяти месяцев после его окончания диагностика может свидетельствовать о присутствии генетической информации возбудителя в крови или других средах и тканях организма.
По истечении указанного срока анализ становится отрицательным.
Плюсы и минусы анализа ПЦР
- Достоинством методики является то, что в отличие от культуральных методов исследования, для выявления инфекции не требуется накопления агентов в организме. А в отличие от серологических анализов крови нет необходимости выжидать выработки антител к антигенам бактерий, вирусов, грибов или простейших. От момента заражения можно проводить тестирование. Идеальным можно считать ситуацию, когда интерпретация результатов проводится в день обращения к врачу. ПЦР выигрывает сравнение с ИФА и посевом по всем показателям, кроме одного: способности принимать прошлую инфекцию за настоящую в связи с высокой чувствительностью.
- Погрешности методики, приводящие к ложным результатам, в основном завязаны на неправильный выбор биологических образцов, удаленных от места воспалительных изменений или загрязнением их посторонней инфекцией в процессе забора или транспортировки, нельзя полностью полагаться на диагностику крови. Для половых инфекций предпочтительнее исследовать соскобы урогенитального эпителия.
- Еще одним аспектом становятся погрешности на этапе выполнения лабораторного этапа: старое оборудование, недостаточная квалификация персонала.
- Поэтому всегда предпочтительнее выбирать для исследования клинику с репутацией. Оснащенную современным оборудованием и расходниками и совмещающую в себе консультативный прием специалистов и лабораторные мощности.
Вариации ПЦР методики
Существуют различные модификации полимеразной цепной реакции, направленные на улучшение результативности.
- Количественная проводится с использованием маркеров ДНК (зондов), которые в реальном времени позволяют подсчитать количество полученного в результате анализа продукта. Участки ДНК, исполняющие роль зонда, иногда заменяют флуоресцирующим красителем, который сильнее светится на меченых участках, удваивающихся ДНК.
- Вариант молекулярных колоний задействует акриламидный гель, благодаря которому образуются молекулярные колонии в точках, где есть искомые ДНК.
- Ступенчатая ПЦР позволяет избегать неспецифичного связывания фрагментов ДНК.
- RAPD используют, когда исследуемый материал может содержать сходные геномы близкородственных организмов и их требуется различить.
- Вложенная позволяет с помощью двух пар праймеров провести две реакции, удвоив не только первичную матрицу, но и продукты ее амплификации.
Выбор методик обусловлен в лабораториях и клиниках обычно не только диагностическими потребностями, но и существующими возможностями.
То есть наличием или отсутствием расходных материалов, используемых в различных модификациях исследований.
Что означает ответ в бланке ПЦР
Отправляясь на обследование, проходя его или получая ответ анализа на руки, не нужно думать, что результат автоматически равняется диагнозу.
Целый ряд обстоятельств может сопровождать присутствие в организме инфекционного агента.
ПЦР определяет не только живой, но и погибший после медикаментозного лечения биологический материал.
Правильно расшифровать и истолковать данные анализов может только грамотный врач-клиницист.
Нельзя пренебрегать полноценной консультацией, лишь обратившись в лабораторию и выполнив исследование.
Каждое заболевание требует полноценного подхода: поиска его причины, разработки тактики лечения и достижения результатов.
Максимально коротким этот путь становится только при содействии врача.
Он в состоянии не только подобрать лечение, но и провести его коррекцию в случае необходимости, а также проконтролировать результаты и эффективность терапии.
Большой процент половых инфекций существует в скрытых, хронических формах или объединяется с другими представителями соей группы.
Хламидиям могут сопутствовать трихомонады и гонококки, гепатитам — ВИЧ и туберкулез, герпесу — папилломавирус.
Даже скудная симптоматика хронических инфекционных процессов или ее отсутствие – не гарантия латентного периода инфицирования или отсутствия позднейших осложнений.
Попытки отмахнуться от проблемы или сэкономить на ее решении часто оборачиваются не только лишними затратами времени и денежных средств.
Но и потерями репродуктивных возможностей и сексуального здоровья.
Рационально выбирая врача, а не только клинику и лабораторию, вы решаете задачу сохранения здоровья максимально эффективно.
При необходимости сдать ПЦР анализ обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.